Northern blot是研究基因表达的更严谨的方法之一,可以定量分析组织中某一特异mRNA的表达丰度,根据其迁移位置也可以判断基因表达转录物的大小。该技术应用十分广泛,常用于分析RNA样品中特定mRNA的大小和丰度,也可用于基因表达调控、基因结构及功能、遗传变异等研究。RNA经变性琼脂糖凝胶电泳分离,转印迹至尼龙膜等固相支持膜上,再与标记的特异性探针杂交,从而分析固定于膜上的mRNA的数量和大小。常用的RNA分析方法有甲醛变性电泳、乙二醛/DMSO变性电泳和狭线印迹杂交三种方法。我公司主要进行甲醛变性电泳方法。 服务内容: 总RNA制备,探针标记,电泳,转移,杂交,显影,图片采集。 技术要点: 1,总RNA的提取及mRNA纯化是更关键的第一步,必须保证mRNA的完整性。 2,转膜效率直接影响检测灵敏度。 3,探针模板纯度是探针标记的关键,我们将模板经切胶回收和纯化,探针质量绝对有保证。 4,杂交、洗膜条件的控制需要操作人员的经验和技巧。 样品要求: 1,客户提供质粒:质粒大小,质粒电泳图谱(要求大小正确、无拖尾、无杂带),质粒总量>50ng,注明是否提供引物。 2,客户提供探针:探针电泳图谱(要求无拖尾、无杂带)、紫外分析数据(A260/280=1.6-1.8,A260/280=1.6-2.0)。 3,客户提供总RNA:要求总量>30μg ,浓度>15μg/μl,总RNA保温电泳图18s~28s,条带清晰,点样孔干净,A260/A280>1.9。 4,客户提供组织样品:要求各样品至少200mg组织或108个细胞样品。 *请您将样品放入离心管中,在-20℃ 或-80℃条件下运输。 操作程序: 1,我们在受到样品后,首先进行初步检测(变性胶电泳分析RNA含量及质量)。 2,实验结束后,为您提供完整的实验报告(Control反应有明显条带为正常结果)。 服务周期:服务时间为15-20个工作日。 收费标准:
项目
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服务标准 |
收费标准 |
总RNA提取 |
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250元/样品 |
Northern blotting |
总RNA提取,探针标记,电泳,转膜,杂交,显色,照片采集 |
5000元/组样品 |
(一个基因,8个样品;同一基因,每增加8个样品,增加3500元)。 结果提交: 包括实验步骤、杂交效果扫描图片、探针电泳图、紫外分光光度检测数值等。 |