Real Time PCR法，也就是实时荧光定量检测PCR扩增量的方法。因其无需电泳，且具有快速性及定量性而倍受青睐。本公司承接利用Real Time PCR法进行课题研究的技术服务，可从引物设计合成开始，至Real Time PCR反应检测的一条龙技术服务，欢迎惠顾！

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【服务项目】

  定性分析

  绝对定量

  相对定量（mRNA表达量分析）

    DNA Microarray数据确认

RNAi效果确认（siRNA的筛选）

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【检测方法】

荧光染料嵌合法（SmartGreen）

TaqMan探针法

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【服务内容】

以相对定量为例。

引物设计（免费）、合成（客户自费）

制作标准曲线。使用设计合成的引物，以客户提供的Total RNA样品为模板，进行Real Time PCR反应，确认引物模板的反应性能。然后将模板进行5个浓度梯度稀释，制作标准曲线，以供进一步定量分析使用。

Real Time PCR反应及定量分析

对客户提供的RNA Sample，进行Real Time RT-PCR反应，并进行定量分析。用相对定量方法进行定量分析时，如客户需要，可对管家基因等参比基因进行同样操作，用所得到的值进行RNA量的校正，更后求得目的基因的相对表达量。

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【服务项目说明】

定性分析

PCR反应结束后的PCR产物无需电泳检测，可以通过Real Time PCR方法，简单快速地对目的基因进行高特异性、高灵敏度的检测，同时闭管操作的实时检测可以有效防止反应产物的污染。本技术可以广泛应用于病毒、病原菌等致病微生物的检测以及各种生物品种的鉴定等。

绝对定量

绝对定量首先必须构建与检测样品目的基因具有相同序列的标准品。使用已知浓度的标准品制作3个点以上的标准曲线后，可以使用标准曲线对未知浓度的检测样品进行绝对量（起始拷贝数）分析。

相对定量（mRNA表达量分析）

基因表达的研究一般采用相对定量的方法。相对定量法必须对样品的目的基因和参比基因内标同时分别进行定量，然后求出对于参比基因的目的基因的相对量。通过对样品间的目的基因的相对量进行比较，可以对不同样品间的mRNA进行表达量分析。参比基因通常选用表达量相对恒定的House Keeping Gene，如：GAPDH、b-actin等。通过同时对参比基因的实时检测，可以对样品之间由于起始细胞数不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量误差进行校正，达到在严格意义上对样品之间的mRNA表达量进行分析之目的。

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【样品要求】

进行mRNA表达量分析时，请寄送足量的并且保证纯度的Total RNA（浓度在100 ng/ml以上，体积在20ul以上)。如果目的基因表达量低时，应尽量提供更高浓度的Total RNA。

如果提供的材料为细胞或组织，DNA、RNA的提取费用另收。同时应保证材料新鲜，动物细胞数为10⁶以上，动植物组织为50mg以上。

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【服务价格】

以下技术服务价格是针对Human、Mouse、Rat等三个生物物种采用染料嵌合荧光（SmartGreen）法的报价。如果是三种生物种以外的物种或采用TaqMan探针方法时，价格请具体垂询!

以下技术服务报价是以提纯的核酸（即DNA或RNA）为起始材料设定的，如果需要进行核酸纯化时，费用另计。进行mRNA表达量分析，如果提供的total RNA量少或目的基因表达量低，Total RNA不能作为标准品使用时，此时需客户自行制备标准品。

以下技术服务报价为1个目的基因的报价。同一材料的N个目的基因的价格=1个目的基因价格×N × 0.75。